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    β-半乳糖苷酶染色試劑盒

    更新:2020-1-3 15:15:52

    中文名:β-半乳糖苷酶染色試劑盒說明書下載暫無
    英文名:β-Galactosidase Staining Kit
    描述:β-半乳糖苷酶染色試劑盒(β-Galactosidase Staining Kit)是以X-Gal為底物,在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產物。從而在光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本試劑盒可以用于培養細胞的衰老檢測,也可以用于組織切片的衰老檢測。 絕大多數正常細胞被認為僅有有限的分裂能力,在不能分裂后就進入衰老(senescence)狀態。此時細胞仍然是存活的,但細胞的基因和蛋白的表達譜發生了很大改變。衰老(senescence)的細胞不能在一些常規的刺激下再誘導細胞分裂,并且衰老細胞的細胞周期分布也比較特殊,不同于一些損傷誘導的細胞休眠,也不同于細胞生長接觸抑制的情況。衰老細胞細胞通常體積變大,表達pH 6.0時有高酶活性的β-半乳糖苷酶。細胞衰老也被認為是生物體抑制腫瘤的一種方式,同時也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。
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      G0622100T520GBCBIO
    產品介紹

      產品簡介:

       β-半乳糖苷酶染色試劑盒(β-Galactosidase Staining Kit)是以X-Gal為底物,在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產物。從而在光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本試劑盒可以用于培養細胞的衰老檢測,也可以用于組織切片的衰老檢測。

      絕大多數正常細胞被認為僅有有限的分裂能力,在不能分裂后就進入衰老(senescence)狀態。此時細胞仍然是存活的,但細胞的基因和蛋白的表達譜發生了很大改變。衰老(senescence)的細胞不能在一些常規的刺激下再誘導細胞分裂,并且衰老細胞的細胞周期分布也比較特殊,不同于一些損傷誘導的細胞休眠,也不同于細胞生長接觸抑制的情況。衰老細胞細胞通常體積變大,表達pH 6.0時有高酶活性的β-半乳糖苷酶。細胞衰老也被認為是生物體抑制腫瘤的一種方式,同時也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。

       

      儲存和穩定性:

        -20℃保存,一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。

       

      試劑盒組成:

      次數

      G0622-100T

      4%多聚甲醛固定液

      100ml

      X-gal 溶液

      5ml

      β-半乳糖苷酶染色A

      1ml

      β-半乳糖苷酶染色B

      1ml

      β-半乳糖苷酶染色C

      100ml

      使用說明:

      1. 對于貼壁細胞:

      1.1.對于6孔板中培養的細胞,吸除細胞培養液,用PBS或HBSS洗滌1次,加入1毫升4%多聚甲醛固定液,室溫固定15分鐘。對于其它類型的培養板,固定液及后續溶液的用量參照此比例進行操作。

      1.2.吸除細胞固定液,用PBS或HBSS洗滌細胞3次,每次3分鐘。

      1.3.吸除PBS或HBSS,每孔加入1毫升染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器,不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器配制染色工作液。染色工作液按下表比列配制:

      β-半乳糖苷酶染色A

      10μl

      β-半乳糖苷酶染色B

      10μl

      β-半乳糖苷酶染色C

      930μl

      X-gal 溶液

      50μl

      說明:對于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡單的判定方法是:聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌; 而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌,一旦高溫高壓處理就會嚴重變形。配制染色工作液時,可能有少量絮狀沉淀出現,震蕩混勻后就會完全溶解,且需要待溶解完全后才能使用。

      1.4.37℃孵育過夜,可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發。注意:37℃孵育不能在二氧化碳培養箱中進行。

      1.5.普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數,可以去除染色工作液,加入2毫升PBS,4℃可以保存數天;或者加上封片液封片后,4℃可以保存較長時間。

      2. 對于懸浮細胞:

      2.1. 離心收集細胞至1.5ml離心管內,用PBS或HBSS洗滌1次,加入1毫升4%多聚甲醛固定液,室溫固定15分鐘。固定時可以在搖床上緩慢搖動,以避免細胞結成團塊。

      2.2. 離心,吸除細胞固定液,用PBS或HBSS洗滌細胞3次,每次3分鐘。

      2.3. 離心,吸除PBS或HBSS,每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考上表。

      2.4. 37℃孵育過夜。注意:37℃孵育不能在二氧化碳培養箱中進行。

      2.5. 取部分染色后的細胞,滴加到載玻片上或6孔板內,普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數,可以離心,去除染色工作液,然后加入1毫升PBS,4℃可以保存數天。如果離心,取細胞用于涂片,加上封片液封片后,4℃可以保存較長時間。

      3. 對于組織切片:

      3.1. 對于石蠟切片先按照常規方法進行脫蠟和水化處理。對于冷凍切片直接按照以下步驟進行。

      3.2. 加入適當體積的β-半乳糖苷酶染色固定液,以充分蓋住組織為宜,室溫固定不少于15分鐘。

      3.3. 用PBS浸泡洗滌組織3次,每次不少于5分鐘。

      3.4. 吸除PBS,加入適當量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

      3.5. 37℃孵育過夜,可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發。最好把整個切片浸泡在染色工作液中。

      注意:37℃孵育不能在二氧化碳培養箱中進行。

      3.6. 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察,加上封片液封片后4℃可以保存較長時間。
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