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    糞便RNA提取試劑盒

    更新:2022-8-8 11:29:36

    中文名:糞便RNA提取試劑盒說明書下載暫無
    英文名:Stool RNA Kit
    描述:檢測糞便中病原菌等微生物、以及一些未消化食物樣品的RNA是現代診斷的重要手段。由于糞便中存在大量抑制因子,常規的RNA純化方式不能有效地去除這些雜質,導致下游實驗的失敗,如PCR不能擴增出所需片段。Stool RNA Kit采用了簡便的硅膠柱純化方式和獨特的溶液系統,能有效去除動物糞便中各種影響下游實驗抑制因子,并能高效地回收糞便中的基因組DNA。一次可處理0.05-0.5g樣品,純化的DNA可直接用PCR等實驗。
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      貨號規格價格品牌
      D130550T780GBCBIO
      D1306100T1380GBCBIO
      D1307200T2480GBCBIO
    產品介紹

      產品簡介

      檢測糞便中病原菌等微生物、以及一些未消化食物樣品的RNA是現代診斷的重要手段。由于糞便中存在大量抑制因子,常規的RNA純化方式不能有效地去除這些雜質,導致下游實驗的失敗,如PCR不能擴增出所需片段。Stool RNA Kit采用了簡便的硅膠柱純化方式和獨特的溶液系統,能有效去除動物糞便中各種影響下游實驗抑制因子,并能高效地回收糞便中的基因組DNA。一次可處理0.05-0.5g樣品,純化的DNA可直接用PCR等實驗。

      試劑盒組成

      產品編號

      R1301

      D1305

      D1306

      D1307

      次數

      5

      50

      100

      200

      純化柱子

      5

      50

      100

      200

      收集管

      5

      50

      100

      200

      Buffer RC1

      4ml

      30ml

      60ml

      120ml

      Buffer RC2

      1ml

      6ml

      12ml

      24ml

      Buffer RC3

      1ml

      6ml

      12ml

      24ml

      Buffer RC4

      1ml

      10ml

      16ml

      35ml

      Buffer RC5

      1ml

      20ml

      37ml

      65ml

      Glass Beads

      2ml

      20g

      40g

      80g

      Wash Buffer I

      2g

      30ml

      55ml

      110ml

      Wash Buffer II

      2

      13ml

      26ml

      26ml*2

      說明書

      1

      1

      1

      1

                       

      儲存和穩定性

      室溫保存,一年有效。Buffer RC2與Buffer RC3可能有沉淀產生,37℃水浴溶解后即可。

      實驗前準備

      請詳細閱讀該手冊并熟悉各個步驟,在開始之前準備好所有的試劑盒組分和必需的器材。

      試劑準備:

      縮的RNA Wash Buffer II 需用無水乙醇按如下稀釋:

      R1301 加8 ml;R1305加入52 ml ;R1306與R1307每瓶加入104 ml 無水乙醇

      Buffer RC1使用前加入終濃度為1%的巰基乙醇,如1ml Buffer RC1加入10μl巰基乙醇。

      需自備器材

      無水乙醇    1.5ml離心管    水浴    離心機

      操作步驟

      1. 0.3-0.5g糞便置于2ml離心管中,加入0.4g Glass Beads,再加入500μl Buffer RC1注意加入5μl巰基乙醇) ,100μl Buffer RC2以及500μl水飽和酚(需自備)。渦旋器高速震蕩3-5min。

      注意:對含水量豐富的樣品,可以預先離心除去部分水分后再稱去樣品。Buffer RC2是我司獨特的腐殖酸除去劑,100μl對大部分樣品來說足以有效除去腐殖酸等抑制因子。對一些腐殖酸含量特別豐富的土壤, Buffer RC2的量可以適當增加,但不能超過250μl,否則會嚴重影響RNA的得率。

      2. 加入200μl Buffer RC3RC3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用),渦旋5-10分鐘。

      3. 加入200μl氯仿渦旋。12000 rpm(~13000×g)離心5鐘,轉600μl上清到1.5ml離心管中,加入180μl Buffer RC4混勻。

      注意:轉移上清時確保不要吸取到沉淀,轉移的上清量最好不超過80%。

      4. 冰上放置5min。12000 rpm(~13000×g)離心5鐘。 轉移上清到新的1.5ml離心管中。

      5. 加入二分之一上清體積的 Buffer RC5與與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向500μl 上清中加入250μl Buffer C3與500μl無水乙醇。

      6. 把上述混勻的液體轉移到GBC分離柱上。10,000×g離心30秒以結合RNA,棄去濾出液體。

      純化柱最大容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

      7. GBC吸附柱中加入500μl Wash Buffer I 離心30秒,棄廢液。

      8. GBC吸附柱 中加入600μl Wash Buffer II,12,000 rpm (~13,400×g ) 離心30 秒,倒掉廢液,GBC吸附柱放入收集管中。

      注意:Wash Buffer II使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)

      9.GBC吸附柱 中加入600μl Wash Buffer II,12,000 rpm (~13,400×g ) 離心30秒,倒掉廢液,將GBC吸附柱放入收集管中。

      10. 12,000 rpm(~13,400×g)離心1分鐘,倒掉廢液,以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

      注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的實驗

      11. GBC吸附柱轉入一個新的離心管中,加30-100μl RNase-free Water,室溫放置2 分鐘,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)離心1分鐘。

      注意:洗脫緩沖液體積不應少于30μl,體積過小影響回收效率。且RNA 應保存在-70℃,以防降解。如果想提高RNA 得率,可重復上步操作一次,合并兩次得到的溶液。


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